昆虫细胞是多种重组蛋白的多功能表达宿主。其较强的折叠能力和较高的培养密度使其成为表达细胞内复杂蛋白和病毒蛋白的理想选择。2007年,由昆虫细胞系以病毒样颗粒(VLPs)的形式生产的病毒疫苗Cervarix被批准用于人类。除了在疫苗开发方面的潜力外,昆虫细胞产生的高活性蛋白还应用于生物物理学和生物化学的各个学科,如结构解释、药物设计、测定方法建立和诊断试剂开发等等。许多生物厂家利用昆虫细胞进行重组蛋白产品开发和承包研究项目。怎么才能让重组蛋白保持良好的稳定性和生物学活性呢?PeproTechIL-1重组蛋白怎么样
哺乳动物蛋白表达系统在生产重组蛋白中的应用中,优势明显。具体表现为以下方面,能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性:哺乳动物为真核细胞,细胞器可以对蛋白正确折叠加工。表达水平高:载体可在哺乳动物细胞中高表达重组蛋白,表达量可高达1-3g/L。蛋白表达高效稳定:高效启动子控制,稳定表达,并可以选择多种表达,如瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)、大规模悬浮细胞表达等。适合大规模蛋白表达:常用的哺乳动物表达宿主细胞(HEK293和CHO),使用悬浮细胞培养,可以在一个月内可产生数克级蛋白。PeproTechIL-1重组蛋白怎么样进口重组蛋白品牌有哪些?
糖基化是指糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。蛋白质经过糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质,帮助蛋白质折叠功能作用。在大多数情况下,生长因子或细胞因子的糖基化作用不会直接影响该蛋白与受体之间的结合。所以在体外研究中,重组生长因子或细胞因子的生物活性不会受糖基化作用的过多影响。不过,糖基化蛋白通常对蛋白酶的降解更不敏感具耐受性,所以在体内的半衰期比未经无糖基化的同种蛋白更长。因此在体内研究中,以选择哺乳动物表达系统或昆虫表达系统生产的重组蛋白可能是比大肠杆菌中生产的同种重组蛋白效果更好的一个选择要好。
在昆虫细胞表达系统中,昆虫细胞需要杆状病毒作为重组蛋白表达的中间体。杆状病毒是一组不同的DNA病毒,能够侵染各种昆虫细胞。它们就像一个穿梭机,将目标基因导入给定的宿主细胞。加州亲笔多核多角体病毒(AcMNPV) 在利用杆状病毒这方面表现出突出的特征。简单地说,将编码感兴趣蛋白质的基因插入一个主要载体,然后将其克隆到一个名为Bacmid的次要载体上。Bacmid被转移到一株细菌(通常是大肠杆菌)中进行初步病毒生产和组装,以获得一代杆状病毒(P1)。P1病毒在昆虫细胞中被扩增(例如sf9)以获得合适的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆虫细胞系(例如High-five)以实现重组蛋白表达。外企的重组蛋白药物占据了全球将近60%的医药市场份额。
如果说明书上没有具体的说明,如何重溶(Reconstitute)冻干的重组蛋白?我们建议采用以下方式:(1)将试剂瓶和重溶缓冲液平衡至室温。(2)短暂离心试剂瓶以确保在小瓶底部收集所有冻干物。(3)加入推荐的重溶缓冲液,达到产品说明上推荐的浓度。避免剧烈振荡或移液器吹打,这可能导致蛋白质变性。(4)使试剂瓶在室温下重溶15-30分钟,可使用360度摇床或手动轻轻上下颠倒。(5)每管体积不小于10μL分装,并按产品说明书上的指示储存。(6)如果小瓶内呈现薄片或颗粒,则在室温下将产品混合几小时,然后在4℃过夜。购买的重组蛋白如何保存?PeproTechIL-1重组蛋白怎么样
重组蛋白无论是保存还是运输,请避免反复冻融。PeproTechIL-1重组蛋白怎么样
生产重组蛋白的酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉,蛋白翻译后能进行正确加工、修饰,合理的空间折叠,使得蛋白的可溶性得到提高,是较优的重组真核生物蛋白生产制备工具。其中毕赤酵母表达系统应用较多,与其他表达系统相比,其较强的AOX1(醇氧化酶)、3-磷酸甘油醛脱氢酶、FLD1(醛脱氢酶)等启动子、蛋白稳定持久表达、表达效率高、可分泌表达蛋白、杂蛋白少、翻译后修饰等优点使其成为酵母表达重组蛋白的优先选择。PeproTechIL-1重组蛋白怎么样
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